No Template Control (NTC) یکی از آلودگی‌های شایع در آزمایشگاه‌های مولکولی، آلودگی با نمونه DNA است. چنانچه این آلودگی در روند آماده سازی مواد برای واکنش Real Time PCR رخ دهد، نتایج حاصل قابل قبول نخواهد بود. لذا در هر Run از Real Time PCR برای اثبات عدم وجود آلودگی با DNA، به ازای هر مخلوط واکنش حداقل یک well بدون نمونه (Template) در نظر گرفته می‌شود. در این واکنش …

ادامه مطلب

در فرآیند Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction یا RT-PCR از نمونه RNA به عنوان توالی الگو در PCR استفاده می‌شود. این فرآیند خصوصاً جهت بررسی تغییرات بیان ژن در سلول‌ها، بافت‌ها و ارگانیسم‌ها اهمیت دارد. در RT-PCR از نمونه‌های مورد بررسی RNA استخراج شده و طی فرآیند رونویسی معکوس و با استفاده از آنزیم Reverse Transcriptase ابتدا به DNA مکمل یا cDNA تبدیل می‌شود. میزان بیان هر ژن از سطح mRNA آن …

ادامه مطلب

در فرآیند PCR معمولی، محصولات PCR از طریق الکتروفورز روی ژل تجزیه و تحلیل می‌شوند که معمولاً فرآیندی زمان‌بر است. اما در تکنیک Real time PCR تجزیه و تحلیل بیان ژن یا محصولات در همان مراحل تکثیر، صورت می‌گیرد و دیگر نیازی به Run کردن نمونه‌ها روی ژل آگارز وجود ندارد. به این منظور میزان نوکلئیک اسید مورد نظر با استفاده از رنگ فلورسنت خاص یا استفاده از الیگونوکلئوتیدهای دارای …

ادامه مطلب

Real Time PCR در فرآیند PCR معمولی، محصولات PCR از طریق الکتروفورز روی ژل تجزیه و تحلیل می‌شوند که معمولاً فرآیندی زمان‌بر است. اما در تکنیک Real time PCR تجزیه و تحلیل بیان ژن یا محصولات در همان مراحل تکثیر، صورت می‌گیرد و دیگر نیازی به Run کردن نمونه‌ها روی ژل آگارز وجود ندارد. به این منظور میزان نوکلئیک اسید مورد نظر با استفاده از رنگ فلورسنت خاص یا استفاده …

ادامه مطلب

Poly Chain Reaction یا PCR روشی برای تکثیر توالی‌های کوچکی از DNA است که در آن از آنزیم DNA Polymerase جهت سنتز رشته‌های جدید DNA از روی توالی الگوی تک رشته‌ای استفاده می‌شود. PCR عمدتاً بر اساس یک سری چرخه حرارتی با افزایش و کاهش دمای متناوب (20 تا 40 تکرار) صورت می‌گیرد. بنابراین، در یک چرخه حرارتی PCR با 30 تکرار، بیش از یک میلیارد نسخه DNA را از …

ادامه مطلب